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原核重组表达his融合蛋白,考马斯亮蓝可以看到条带,western为什么检测不出来

用PET46-,表达his融合蛋白,考马斯亮蓝可以看到表达条带,western检测HIS标签,却杂不出来,求帮助,已经做了很多次了,就是杂不出来,蛋白也重新纯化过了两次了,考马斯亮蓝染色带是没问题的,western用His抗体就是检测不到条带,加了一个阳性对照却有条带,不知道是什么原因


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